Abstract: La proteína de la envoltura del virus del dengue (DENV) es un objetivo principal de la respuesta inmunitaria humoral. Se sabe que el dominio III de la proteína de la envoltura de DENV (EDIII) es el objetivo de múltiples anticuerpos potencialmente neutralizantes. Uno de estos anticuerpos es 3H5, un anticuerpo de ratón que se une fuertemente a EDIII y neutraliza potentemente el serotipo 2 de DENV (DENV-2) con una potenciación dependiente de anticuerpos (ADE) inusualmente mínima. Para mostrar selectivamente el epítopo de unión de 3H5, modificamos estratégicamente DENV-2 EDIII protegiendo otros epítopos conocidos con sitios de N-glicosilación modificados. Las modificaciones dieron como resultado un antígeno EDIII glicosilado denominado "mutante N de EDIII". Este antígeno se utilizó con éxito para tamizar a través de una biblioteca de fagos scFv inmunes al dengue para seleccionar anticuerpos scFv que se unen o rodean estrechamente el epítopo 3H5. Los anticuerpos scFv seleccionados se expresaron como anticuerpos humanos de longitud completa y mostraron una potente actividad de neutralización contra DENV-2 con ADE baja o insignificante que se asemeja a 3H5. Estos hallazgos no solo demuestran la capacidad del mutante N de EDIII N-glicosilado como herramienta para impulsar una campaña de selección de anticuerpos dirigida a epítopos, sino que también destacan su potencial como inmunógeno del dengue. Este antígeno glicosilado es prometedor para enfocar la respuesta de anticuerpos hacia un epítopo potencialmente neutralizante, al tiempo que reduce el riesgo de potenciación dependiente de anticuerpos.
La protéine d'enveloppe du virus de la dengue (DENV) est une cible principale de la réponse immunitaire humorale. Le domaine III de la protéine d'enveloppe DENV (EDIII) est connu pour être la cible de multiples anticorps neutralisants puissants. L'un de ces anticorps est le 3H5, un anticorps de souris qui se lie fortement à l'EDIII et neutralise puissamment le DENV de sérotype 2 (DENV-2) avec une amélioration anormalement minime dépendante des anticorps (ADE). Pour afficher sélectivement l'épitope de liaison de 3H5, nous avons stratégiquement modifié DENV-2 EDIII en protégeant d'autres épitopes connus avec des sites de N-glycosylation modifiés. Les modifications ont abouti à un antigène EDIII glycosylé appelé « N mutant EDIII ». Cet antigène a été utilisé avec succès pour passer au crible une bibliothèque de scFv-phages immunisés contre la dengue afin de sélectionner les anticorps scFv qui se lient à l'épitope 3H5 ou l'entourent étroitement. Les anticorps scFv sélectionnés ont été exprimés sous forme d'anticorps humains complets et ont montré une puissante activité de neutralisation du DENV-2 avec un ADE faible ou négligeable ressemblant à 3H5. Ces résultats démontrent non seulement la capacité du mutant N-glycosylé EDIII N en tant qu'outil pour mener une campagne de sélection d'anticorps dirigée contre l'épitope, mais mettent également en évidence son potentiel en tant qu'immunogène de la dengue. Cet antigène glycosylé est prometteur pour concentrer la réponse anticorps vers un épitope neutralisant puissant tout en réduisant le risque d'amélioration dépendante des anticorps.
The envelope protein of dengue virus (DENV) is a primary target of the humoral immune response. The domain III of the DENV envelope protein (EDIII) is known to be the target of multiple potently neutralizing antibodies. One such antibody is 3H5, a mouse antibody that binds strongly to EDIII and potently neutralizes DENV serotype 2 (DENV-2) with unusually minimal antibody-dependent enhancement (ADE). To selectively display the binding epitope of 3H5, we strategically modified DENV-2 EDIII by shielding other known epitopes with engineered N-glycosylation sites. The modifications resulted in a glycosylated EDIII antigen termed "EDIII mutant N". This antigen was successfully used to sift through a dengue-immune scFv-phage library to select for scFv antibodies that bind to or closely surround the 3H5 epitope. The selected scFv antibodies were expressed as full-length human antibodies and showed potent neutralization activity to DENV-2 with low or negligible ADE resembling 3H5. These findings not only demonstrate the capability of the N-glycosylated EDIII mutant N as a tool to drive an epitope-directed antibody selection campaign but also highlight its potential as a dengue immunogen. This glycosylated antigen shows promise in focusing the antibody response toward a potently neutralizing epitope while reducing the risk of antibody-dependent enhancement.
البروتين المغلف لفيروس حمى الضنك (DENV) هو الهدف الأساسي للاستجابة المناعية الخلطية. من المعروف أن المجال الثالث لبروتين غلاف DENV (EDIII) هو هدف العديد من الأجسام المضادة المعادلة بقوة. أحد هذه الأجسام المضادة هو 3H5، وهو جسم مضاد للفأر يرتبط بقوة بـ EDIII ويحيّد بقوة النمط المصلي لـ DENV 2 (DENV -2) مع الحد الأدنى غير المعتاد من التعزيز المعتمد على الأجسام المضادة (ADE). لعرض الحاتمة الملزمة لـ 3H5 بشكل انتقائي، قمنا بتعديل DENV -2 EDIII بشكل استراتيجي عن طريق حماية الحاتمات المعروفة الأخرى بمواقع N - glycosylation المهندسة. أدت التعديلات إلى مستضد EDIII الغليكوزيلاتي المسمى "EDIII mutant N". تم استخدام هذا المستضد بنجاح للتدقيق في مكتبة scFv - phage المناعية لحمى الضنك لاختيار الأجسام المضادة scFv التي ترتبط بحاتمة 3H5 أو تحيط بها عن كثب. تم التعبير عن الأجسام المضادة scFv المختارة كأجسام مضادة بشرية كاملة الطول وأظهرت نشاط تحييد قوي لـ DENV -2 مع ADE منخفض أو ضئيل يشبه 3H5. لا تُظهر هذه النتائج فقط قدرة الطفرة N - glycosylated EDIII كأداة لقيادة حملة اختيار الأجسام المضادة الموجهة بالحاتمة ولكنها تسلط الضوء أيضًا على إمكاناتها كمستضد لحمى الضنك. يُظهر هذا المستضد الغليكوزيلاتي وعدًا في تركيز استجابة الأجسام المضادة نحو حاتمة محايدة بشكل فعال مع تقليل خطر التعزيز المعتمد على الأجسام المضادة.
Processing Request
No Comments.